|
Makale Özeti:
|
Aim. To elucidate the role of Th1/Th2 polarization of immune response in LADA patients in the realization of the clinical phenotype of the disease.
Materials and methods. 70 patients aged 21-61 (mean 41.3+-1.0 yr) with DM diagnosed based on WHO criteria (1999). Groups 1 and 2 included 13 DM1
and 57 DM2 patients (34.6+-7.2 and 43.6+-7.6 yr respectively). 27 DM2 patients (41.2+-1.6 yr) presumably had LADA (P. Zimmet's criteria).
Serum anti-GAD65, ICA, and IAA antibodies along with C-peptide were measured in fasting sera and 120 min after GTT by solid phase immunoenzyme
assays following manufacturer's instructions with the use of a photometer for Multiscan EX microplates (ThermoLabSystems, Finland) at
405 nm (for GAG and ICA) and 450 nm (for IAA and C-peptide). GAD, IAA, and C-peptides levels were calculated automatically from calibration
curves. Mononuclear leukocytes were isolated by centrifugation in the ficoll-verographin density gradient. The cells thus obtained were resuspended
in the complete nutritient medium reducing their concentration to 2.0x10^6/ml. Phytohemagglutinin (Difco, Germany) was added (10 mcg/1 ml) to
the samples to stimulate mononuclear leukocytes; cell suspensions were further incubated for 24 hr. Initial and PGA-induced levels of IL-2, 4, 10 in
supernatants of cell cultures were measured by solid phase immunoassay at 450 nm.
Results. At least one type of autoantibodies (GAD, ICA or IAA) was identified in 24.3% of all DM patients (17/70) and in 18% of the DM2 patients
(10/57). The level of anti-GAD and ICA ABs and percentage of AB-positive patients were higher in the LADA group while that of anti-IAA ABs among
DM1 patients without LADA. Two AB types at a time were found in 17% (4/23) of the patients with autoimmune DM in the absence of significant
difference between LADA and DM1. Patients with LADA had a significantly lower basal C-peptide level than DM2 patients. The was a tendency
toward lower level of stimulated C-peptide secretion in LADA patients compared with DM2 ones. It suggests impairment of B-cell secretory function
affected by the autoimmune process. We observed enhanced basal production of IFN-y by blood mononuclear leukocytes in all DM patients in the
absence of significant difference between the groups. Mitogen-activated production in all CD patients was lower than normal without inter-group
differences. Patients with DM2 had the inverted type of IL-2 secretion unlike those with autoimmune diabetes. In both cases it was significantly different
from normal values. There was a tendency toward higher basal production of IL-4 by mononuclear leukocytes in LADA and DM2 compared
with CD1 which reflects pathogenetic peculiarities of T-cell function in LADA differing from those in DM1 and responsible for slower impairment of
B-cell function in this condition. Basal and PGA- induced production of IL-10 was higher in LADA and DM2 than in DM1. It suggests enhanced
suppressor activity of leukocytes that may protect B-cells from autoimmune destruction and determines gradual development of clinical symptoms of
insulin deficiency. In contrast, low production of IL-10 in DM1 gives evidence of polarization of the immune response.
Conclusion. The loss of functional parenchyma and manifestation of insulin deficiency in LADA occur at a relatively low rate due to the peculiar
character of cytokine-mediated cell interactions. It suggests the necessity of an active and careful diagnostic strategy with the use of immunological
methods for examination of elder patients presenting with a variety of pathogenetic variants of DM.
|
|
Alternatif Dilde Özet:
|
Цель. Установить закономерности Th1/Th2-поляризации иммунного ответа у больных латентным аутоимунным диабетом взрослых -
latent autoimmune diabetes mellitus in adults (LADA) и ее роль в реализации клинического фенотипа заболевания.
Материал и методы. В исследование было включено 70 пациентов в возрасте от 21 до 61 года (средний возраст - 41,3±1,0 г.). Диагноз
сахарного диабета (СД) устанавливался на основании критериев ВОЗ (1999 г). Выделено несколько групп: группу с СД 1 типа (СД1) со-
ставили 13 человек (34,6±7,2 г.), с СД 2 типа (СД2) - 57 человек (43,6±7,6 г.). Среди пациентов с диагнозом СД2, согласно критериям
P. Zimmet, были отобраны пациенты с вероятным LADA - 27 человек (41,2±1,6 г.).
Проводили определение присутствия в сыворотке у больных аутоантител (АТ) к декарбоксилазе глутаминовой кислоты (GAD65),
к клеткам островков Лангерганса (ICA) и к инсулину (IAA), определение С-пептида в сыворотке у больных, полученной утром натощак
и на 120-й мин стандартного теста толерантности к глюкозе (ТТГ), методом твердофазного иммуноферментного анализа по ин-
струкциям, предлагаемым производителями тест-систем. Учет результатов иммуноферментного анализа проводили с помощью фото-
метра для микропланшетов «Multiscan EX» («ThermoLabSystems», Финляндия) при длине волны 405 нм для GAD и ICA, 450 нм - для IAA
и С-пептида. Концентрации GAD, IAA и С-пептида вычислялись автоматически по калибровочным кривым.
Мононуклеарные лейкоциты выделяли на градиенте плотности фиколл-верографин. Для получения супернатантов выделенные клетки
ресуспендировали в полной питательной среде, стандартизируя их количество до 2,0106/мл. Для стимуляции мононуклеарных лейкоцитов
в пробы вносили фитогемагглютинин («Difco», Германия) (10 мкг на 1 мл) с дальнейшей инкубацией клеточных суспензий в течение 24 ч.
Определяли спонтанные и фитогемагглютинин (ФГА)-стимулированные уровни интерлейкинов-2, -4 и -10 (IL-2, IL-4, IL-10) в супер-
натантах клеточных культур с использованием твердофазного иммуноферментного метода по инструкциям, предлагаемым произво-
дителями, учет результатов осуществляли при длине волны 450 нм.
Результаты. АТ хотя бы одного типа (GAD, ICA или IAA) выявлены у 24,3% пациентов среди всех больных СД (17/70). Причем среди
больных с клиническим фенотипом СД2 - у 18% (10/57). Концентрация GAD- и ICA-АТ и процент АТ‑положительных пациентов были
выше у пациентов с LADA, а IAA - в группе с СД1 с классическим вариантом развития. Одновременно два типа АТ присутствовали
у 17% (4/23) пациентов с аутоиммунным СД без статистически значимых различий между группами LADA и СД1. Пациенты с LADA
характеризовались достоверно более низким базальным уровнем С-пептида, чем пациенты с СД2. Отмечена тенденция к более низкой
стимулированной секреции С-пептида при LADA, по сравнению с пациентами с СД2, что отражает снижение секреторной способности
-клеток при их аутоиммунном повреждении.
В нашем исследовании отмечено повышение базальной продукции интерферона-гамма (IFN-) мононуклеарными лейкоцитами
крови у всех пациентов с СД. Достоверных различий между подгруппами пациентов с СД зарегистрировано не было. Митоген-сти-
мулированная продукция у всех пациентов с СД также достоверно отличалась от контрольных значений в сторону уменьшения,
без существенных различий между подгруппами пациентов с разным фенотипом СД. У пациентов с СД2 отмечался инвертирован-
ный тип секреции IL-2, в отличие от аутоиммунного диабета; различия были достоверны по сравнению с контролем. Отмечена
тенденция к более высокой базальной продукции мононуклеарными лейкоцитами IL-4 у больных LADA и СД2 по сравнению с паци-
ентами с СД1. ФГА-стимулированная продукция IL-4 при LADA и СД2 была также достоверно выше, чем при СД1. Это, вероятно,
отражает патогенетические особенности функционирования Т-звена иммунной системы при LADA, отличные от механизмов
развития СД1, и определяющие медленное повреждение -клеток при этом заболевании, что фенотипически приближает LADA
к СД2. При оценке базальной продукции IL-10 установлено достоверно более высокое его содержание в супернатантах у паци-
ентов, страдающих LADA, затем - при СД2 и наименьшие - у больных СД1. Наиболее высокий уровень ФГА-стимулированной
продукции IL-10 отмечался у пациентов, страдающих LADA и СД2, минимальный - у больных СД1. Высокий уровень базальной
и ФГА-стимулированной продукции IL-10 мононуклеарными лейкоцитами при LADA свидетельствует о повышении супрессорной
активности мононуклеарных лейкоцитов, которая, возможно, имеет протективное значение в отношении аутоиммунной де-
струкции -клеток и детерминирует постепенное развитие клинических симптомов инсулиновой недостаточности. Напротив,
низкий уровень базальной и ФГА-стимулированной продукции IL-10 при СД1 свидетельствует в пользу Th1 поляризации иммунного
ответа.
Заключение.Вследствие особенностей цитокинопосредованных клеточных взаимодействий при LADA потеря функциональной парен-
химы и манифестация инсулиновой недостаточности развивается медленно, растягиваясь на годы. Вышеизложенное требует более
активной и тщательной диагностической тактики с использованием иммунологических методов обследования в группе пациентов
в старшей возрастной группе, где представлены различные патогенетические варианты СД.
|